转基因工厂两年安全测试
以下是研究项目的结论和建议”转基因工厂两年安全测试)，就设计、行为、解释、分析动物喂养研究及其对转基因生物风险评估的价值由欧盟委员会资助。
结论和建议草案
1.全食/饲料大鼠喂养研究对转基因生物风险评估的科学价值
1.1.G-TwYST项目提供了一套广泛的数据，表明与欧洲食品安全局公布的早期风险评估(欧洲食品安全局2003年)相比，转基因植物的风险评估用天然食品/饲料喂养大鼠的试验结果不会产生更多关于转基因玉米NK603可能存在的健康风险的信息。这一方法包括转基因品系相对于传统对照品系和其他非转基因品系(参考品系)的基因改造的分子特征、表型、农艺和成分分析，以及就可能对人类和动物健康和环境产生的不利影响评估所有已确定的预期和潜在的非预期差异。
1.2.在对转基因玉米NK603的最初评估中，没有发现对人和动物的潜在风险。特别是，从NK603的分子表征和成分、表型和/或农艺分析中，没有确定动物喂养研究的触发因素。因此，G-TwYST 90天和长期的动物研究是在没有具体假设的情况下进行的。来自90天和长期啮齿动物喂养研究的G-TwYST数据也没有确定潜在风险，因此支持最初分析的结果。
1.3.在使用NK603进行的90天大鼠喂养研究过程中，未发现潜在风险。
使用NK603长期喂养大鼠的G-TwYST数据也没有识别出潜在的风险，因此支持最初分析和90天大鼠喂养的结果
研究。
1.4.三种免疫功能测定(有丝分裂原和淋巴细胞增殖活性)蛋白质
刺激、细胞因子的产生、白细胞的吞噬活性和呼吸爆发)不包括在OECD单一物质测试指南408中，在用转基因玉米NK603进行的两个90天大鼠喂养试验过程中进行。在两项研究中，转基因玉米NK603均未影响免疫功能。许多被测变量的精度很低，因此在80%的功率下只能检测到非常大的差异。综上所述，上述分析并没有增加90天大鼠饲养试验的科学价值。
1.5.应仔细评估使用天然食品/饲料进行饲养试验的必要性
考虑到所需的动物数量较多(在G-TwYST项目中，在综合毒性/致癌性研究中:720、172和268只，转基因玉米NK603的90天饲养试验和转基因玉米NK603的90天饲养试验分别为11%和33%的纳入率)。
2.设计，进行，分析和解释大鼠喂养全食物/饲料转基因风险评估研究
2.1.一般问题
2.1.1.经合组织关于亚慢性毒性试验的试验准则408和关于啮目动物慢性毒性/致癌性联合试验的试验准则453(经合组织1998年和2009年)概述的议定书是为测试化学品而设计的，并提供了确定90天、1年和2年重复接触化学品所造成的健康危害的标准程序。经合组织试验指南建议至少使用10只动物/性别和组进行亚慢性毒性试验，20只动物/性别和组进行慢性毒性试验，至少50只动物/性别和组进行致癌性试验。
为了测试化学物质是否会导致毒性，可以将化学物质以比人类接触到的化学物质高好几倍的剂量单独给啮齿动物服用。天然食品/饲料含有多种成分的混合物，为了避免营养失衡，只能以相当有限的水平喂给啮齿动物。因此，在全食品/饲料中少量且具有低毒潜能的物质不太可能在动物喂养试验中造成任何可观察到的影响(欧洲食品安全局转基因生物小组动物喂养试验工作组，2008年)。
2.1.2.G-TwYST已经表明，在相同的实验设施中，用被认为是安全的非转基因植物材料喂养的以前类似试验的参考动物组可以用来定义每个端点的常规带宽。在毒理学研究中用于发现试验组和对照组之间差异的传统统计检验不能区分生物学相关和非相关效应大小，欧洲食品安全局建议更加强调使用置信区间(欧洲食品安全局2011b)。基于置信区间方法，可以使用等价检验来显示测试组在根据历史数据定义的带宽范围内(“安全证明”)。
另一种方法是使用毒理学定义的副作用量化来定义带宽。然而，在动物研究中测量的终点往往无法获得这些指标。使用历史数据来推导等效限值的优点是不需要毒理学上定义的副作用量化，因为后者可以假设位于等效区域之外。
2.1.3.在上述背景下，在之前GRACE项目中进行的90天和1年大鼠喂养试验中获得的非转基因数据被用作G-TwYST项目中等价性检验的历史对照数据。G-TwYST提出并应用了一种统计方法进行等效性检验，该方法考虑了当前90天喂养试验和2年喂养试验的慢性毒性试验阶段以及历史参考数据中的统计不确定性(van der Voet et al. 2017, Goedhart和van der Voet 2017, 2018a, 2018b)。
2.1.4.对GTwYST项目过程中进行的大鼠喂养试验获得的数据的分析表明，在1424个等效性试验和3472个差异性试验中，不超过5%的情况出现了不显著的等效性和显著性差异，这是使用5%误差水平的统计试验的预期百分比。
2.1.5.有人提出了评估来自转基因植物的天然食品/饲料的90天和延长喂养试验的科学质量的标准(Schmidt等人，2016年)。在上市前批准程序中评估啮齿类动物饲养试验时，应考虑到这些因素。在风险评估中纳入一项不(完全)符合拟议质量标准的动物喂养研究，应逐案决定。
2.1.6.如果计划在与上市前批准程序不相关的研究项目过程中对来自转基因植物的全食品/饲料进行90天、1年和/或2年喂养研究，则这些研究应基于相应的经合组织单一化学品测试指南，并考虑到欧洲食品安全局的建议以及G-TwYST提出的质量标准(Schmidt et al. 2016)。
2.2.90天饲养试验
2.2.1.试验采用转基因玉米NK603，在饲粮中添加率分别为33%和50%，为期90天。他们的研究设计基于OECD单一化学品测试指南408 (OECD 1998)，并考虑到欧洲食品安全局指导文件(EFSA 2011a)以及欧洲食品安全局关于全饲料/饲料90天喂养试验的解释声明(EFSA 2014)。
2.2.2.所有使用的饲料都是等热量和等蛋白的。将纳入率从33%提高到50%
如欧洲食品安全局(2014年)早前建议的，而重新平衡饮食成分则没有
在90天喂养试验中出现任何营养失衡的迹象。
2.2.3.G-TwYST评估了试验组和对照组之间的所有显著差异
对照组，考虑等效性，影响是否与剂量相关和/或
伴随相关参数的变化。结论是无不良反应
与转基因玉米NK603栽培或不栽培有关的影响
摘要。
2.2.4.G-TwYST对90天研究的定量结果进行了幂函数分析
可以用80%的功率估计的效应大小(Goedhart和van der Voet 2018c)。为
根据经合组织测试指南408(1998)和欧洲食品安全管理局指导文件(2011a)所提倡的5种单一化学品的检测清单中的变量，如身体/器官重量、血液学和临床化学变量，如果偏差为1.3-，则90天研究中每组8个笼子的设计适用于80%以上的定量变量
折叠(+30%或-23%)或更多必须在至少80%的功率下检测到。
但是，经合发组织(1998年)所要求衡量的数量变量的数量是
在G-TwYST研究中发现了这些变量的组内变异性
变异:变化很大，1%到44%之间表示为变异系数10 - 20%
的比较高的可变性的变量将需要更大的样本量来获得
和其他变量的幂一样。
结论是，除了设定感兴趣的效应大小外，还应进行事先选择
在功率分析之前，这些变量需要足够高的功率
根据经合组织测试指南设置90天动物研究的样本量是有帮助的
408(1998)和欧洲食品安全局文件(欧洲食品安全局2011a, 2014)。这些考虑强调了
进行具有明确目标假设的天然食品/饲料研究的必要性。
2.3.慢性毒性/致癌性联合喂养试验
2.3.1.以含率为33%的转基因玉米NK603为试材，进行了慢性毒性和致癌性的联合研究。其研究设计基于OECD单一化学品测试指南453 (OECD 2009b)，并考虑到EFSA对上述OECD测试指南对全食品/饲料测试适用性的考虑(EFSA 2013)。转基因玉米NK603及农达处理后的转基因玉米NK603均未见毒理学相关效应。
2.3.2.G-TwYST进行了天然食品/饲料结合慢性毒性/致癌性的研究
50只动物/性别和群体为致癌性阶段，这是最小数量
经合组织测试指南451 (2009a)和453 (2009b)要求。功率分析
定性(是/否)结果，如死亡和组织病理学结果，表明
这样一种被普遍接受的设计，只能检测到单个发生率的较大差异
至少80%的功率(Goedhart和van der Voet 2018c)。
增加动物数量的帮助有限，因此不是一个建议的方向
用于未来的动物研究。例如，当对照发生率为1%时，9倍而不是
100只而不是50只动物/性别和群体可以检测到16倍的增长，当
对照组发病率为10%，增加了2.4倍，而不是3.2倍。这些变化的程度
通常大于毒理学家判断的最小相关值。低
敏感性是调查结果的性质所固有的。
因此，一个更恰当的结论是，这样的结果的潜在有用性
研究在于对研究结果模式的可能性解释，而不是单一的分析
端点。
2.3.3.G-TwYST证实了定量测量的可变性
慢性毒性/致癌性研究一般在12和
24个月，而3或6个月(Goedhart and van der Voet 2018a, 2018d)。
因此，在12或24岁以后，检测出一定差异的统计力会降低
相比于3或6个月，转基因植物风险可能需要更大的样本
根据12或24个月的数据进行评估。在临床化学和血液学方面
在两年终止期实施的措施，科学界对其意见不一
实际价值，因为同时出现与年龄有关的疾病，如终末期肾脏
荷尔蒙的衰老，增加了变异从而混淆了解释
与这些影响相关的血清参数(Young等，2011年)。因此，OECD TG
453将是否采取这些措施的选择权交给6个研究主任(经合组织，2009年b)。类似的终点在12个月终止时间点的变化较小，但在90天终止时间点的变化较大，因为即使在这一相对较短的时间内，一些动物也会过早出现与年龄相关的疾病。
3.在安全评估过程中对植物和饲料的成分分析
3.1.在G-TwYST过程中，采用标准和/或认证的化学分析方法对有限数量的质量控制样品进行评估和监测玉米粒和饲粮的营养成分、抗营养成分以及包括真菌毒素和农药在内的有害污染物的质量。这种化学和成分分析允许:
- 评估食用植物材料后对人类的潜在不良影响，并在饲养研究过程中控制饲料质量。
4.涉众参与、透明度和数据可访问性
4.1.为确保利益攸关方的参与、透明度和数据可及性做出了大量努力。这些包括:
- 涉众参与项目计划和结果;
- 提供研究计划草案和初步研究结果(所有数据供利益相关方审查;
- 一个讨论、系统地考虑和回应所有涉众意见的程序，同时跟踪这些意见在项目中的考虑情况;
- 所有步骤的详细文件和透明度;
- 开放存取的出版物，以及一个开放存取的仓库，以供在学术出版物的结果之后使用的原始数据。
4.2.该方法得到了大多数利益攸关方参与者的高度赞扬。项目
团队成员经历了涉众的贡献，这有助于改进项目
在进行的研究类型，解释结果，计划和结果的清晰度方面。
经历的挑战包括欧盟资助项目的有限灵活性
涉众的建议导致工作计划的修改，没有足够的时间进行深入研究
对话。
4.3.这些挑战以及所需的大量资源和努力并不表明这一点
在日常工作中使用的方法。然而，在高度争议的科学技术
问题和两极分化的观点，这种方法仍然是一个有趣的选择，以提高质量
研究的社会稳健性——特别是在工作计划不那么死板的项目中，
时间安排和预算分配。
要阅读整个研究，请访问G-TwYST．